Seuraava on yleiskatsaus epäsuoran immunofluoresenssivärjäysprotokollan eri vaiheisiin
- Kokeilusuunnittelu ja näytteen valmistelu. …
- Näytekiinnitys. …
- Solujen läpäisy. …
- Estäminen. …
- Primäärinen vasta-aineinkubaatio. …
- Toissijaisen vasta-aineen inkubaatio. …
- Vastaväri ja asennus.
Miten suoritat immunofluoresenssin?
Kaikki inkubaatiovaiheet tapahtuvat huoneenlämmössä
- Pese kennot kahdesti ja aseta pinseteillä varovasti ylös käännetyt kennot peittävä lasi kostutettuun kammioon.
- Kiinnitä 4 % formaldehydillä 10 minuutiksi ja pese 3 ×.
- Läpäisevä 0,1 % TX-100/PBS:llä 15–20 minuutin ajan ja pese 3 ×.
Kuinka käytät immunofluoresenssia solussa?
Immunofluoresenssiprotokolla kiinnittyneille soluille
- Siemennä 1–1,5 x104 solua 4-kammioisen objektilasin kuoppaa kohti 500 ml:ssa viljelyalustaa. Inkuboi 37°C:ssa 5 % CO2.
- 32–36 tuntia solujen istutuksen jälkeen, poista soluviljelyalusta ja huuhtele solut 3 kertaa käyttämällä 500 µl 1X PBS:ää.
Mikä on esimerkki immunofluoresenssista?
Tutkija voi esimerkiksi luoda primäärisiä vasta-aineita vuoheen, jotka tunnistavat useita antigeenejä, ja sitten käyttää väriaineeseen kytkettyjä kanin sekundaarisia vasta-aineita, jotka tunnistavat vuohen vasta-aineen vakioalueen (" kanin anti-vuohi" vasta-aineet).
Mitä hyötyä immunofluoresenssivärjäyksestä on?
Immunofluoresenssivärjäys (IF) on laaj alti käytetty tekniikka biologisessa tutkimuksessa ja kliinisessä diagnostiikassa IF käyttää fluoresoivasti leimattuja vasta-aineita spesifisten kohdeantigeenien havaitsemiseen. Kuvaamisen jälkeen se on erittäin suora tekniikka, koska voit todella nähdä jotain.