Jos proteiinisi ei ole samankokoinen kuin vasta-aine, voit eluoida 0,1M glysiinillä, pH 2-3 ja sitten erottaa kiinnostavan proteiinin vasta-aineesta SEC:n avulla. (kuten superdex 200).
Mitä proteiini eluoituu?
Proteiinit eluoidaan gradientilla, jossa on kasvavia määriä orgaanista liuotinta, kuten asetonitriiliä. Proteiinit eluoituvat hydrofobisuuden mukaan. HPLC-puhdistuksen jälkeen proteiini on liuoksessa, joka sisältää vain haihtuvia yhdisteitä, ja se voidaan helposti lyofilisoida.
Miksi proteiinien pH on alhainen?
Matalan pH:n puskurin käytön proteiini A:n eluoinnissa tiedetään edistävän tuotteiden aggregaatiota Rajoitetumpi näyttö kuitenkin viittaa siihen, että alhainen pH ei ehkä ole ainoa Aggregaation syynä proteiini A -kromatografiassa, pikemminkin muut prosessin osa-alueet voivat vaikuttaa merkittävästi.
Kuinka eluointi tapahtuu?
Analyyttisessä ja orgaanisessa kemiassa eluointi on prosessi, jossa uutetaan yksi materiaali toisesta pesemällä liuottimella; kuten ladattujen ioninvaihtohartsien pesussa vangittujen ionien poistamiseksi. … Kun liuotinmolekyylit syrjäyttävät analyytin, analyytti voidaan viedä ulos kolonnista analysointia varten.
Kuinka monta vasta-ainetta tarvitset Coipille?
Rutiinisissa Co-IP-kokeissa käyttämäni vasta-aine on enintään 2 ug (Minun sarjassani 1,4 -2,0 g vasta-ainetta riittää 2500-5000 ug:n sieppaamiseen proteiinilysaatti.) Mutta se on silti riippuvainen kohdeproteiiniesi ilmentymistasoista näytteissäsi, joten sinun on todennäköisesti tehtävä joitain muutoksia.
