Vorteksointi ei leikkaa RNA:tasi tehdäkseen siitä käyttökelvottomaksi, jos teet satunnaista esikäsittelyä - vain jos haluat kloonata pitkän mRNA:n. Invitrogenin tekninen tuki on myös oikein. Kloroformi on raskaampaa kuin Trizol ja uppoaa putken pohjalle.
Onko RNA:n vorteksointi turvallista?
Älä vorteksoi Trizol-lysaatteja tai RNA-näytteitä leikkauksen välttämiseksi. Pidä RNA-näytteitä koko ajan jäällä uuttamisen jälkeen. Tämä protokolla on suunniteltu näytteille, jotka on hajotettu 1 ml Trizolia 1,5 tai 2 ml:n putkessa.
Voitko lämmittää RNA:ta?
Vältä siksi korkeita lämpötiloja ( yli +65°C), koska ne vaikuttavat RNA:n eheyteen. Sen sijaan sekundaarirakenteiden sulattamiseksi RNA:ta lämmitetään +65 °C:seen 15 minuutiksi denaturoivien puskureiden läsnä ollessa.
Kuinka RNA-pelletit suspendoidaan uudelleen?
suspendoi pelletti uudelleen lämpimään veteen (40-50 astetta). inkuboi 45 asteessa 10 minuuttia. laita ne in +4 4-6 tunniksi.
Kuinka saostat RNA:n?
A.
Kun suolapitoisuus on säädetty, RNA voidaan saostaa lisäämällä 2,5 tilavuusosaa etanolia tai 1 tilavuusosaa isopropanolia ja sekoittamalla huolellisesti, jonka jälkeen jäähdytetään vähintään 15 minuuttia -20 °C:ssa.