Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) -määritys on menetelmä, jota käytetään suoraan visualisoimaan proteiini-proteiini-vuorovaikutus in vivo käyttämällä elävien solujen kuvantamista tai kiinnitettyjä soluja. … BiFC:n kuvasivat ensimmäisenä Hu et al.
Kuinka bimolekulaarinen fluoresenssikomplementaatio toimii?
BiFC:n toimintaperiaate perustuu fluoresoivan kompleksin kehittymiseen fluoresoivan proteiinin kahden segmentin yhdistymisen seurauksena, kun ne ovat lähellä toisiaan fragmenttien proteiini-proteiinivuorovaikutuksesta, ts., BiFC:ssä fluorofori on jaettu amino- ja karboksyyliterminaalisiin päihin.
Mikä on BiFC-testi?
bimolecular fluorescencecomplementation (BiFC) -määritys mahdollistaa yksinkertaisen ja suoran visualisoinnin proteiinivuorovaikutuksista elävissä soluissa (45). BiFC-lähestymistapa perustuu fluoresoivan kompleksin muodostumiseen, kun kaksi proteiinia, jotka on fuusioitu fluoresoivan proteiinin ei-fluoresoiviin fragmentteihin, ovat vuorovaikutuksessa toistensa kanssa (kuva
Miksi BiFC-testi tehdään?
BiFC:n idea on ilmaista puolikkaita GFP:tä, jotka on fuusioitu kiinnostaviin proteiineihisi Jos POI:t ovat vuorovaikutuksessa, voit yhdistää molemmat puolikkaat toimivan GFP:n saamiseksi. Joten jos solussa on puolet GFP:stä, en ole yllättynyt, että GFP-vasta-aine pystyy havaitsemaan sen.
Onko BiFC palautuva?
BiFC-kompleksien palautumattomuus on dokumentoitu hyvin (10), ja näyttää siltä, että useimmat, elleivät kaikki, fluoresoivaan proteiiniin perustuvat BiFC-järjestelmät ovat peruuttamattomia (8, 33, 43, 48–51).
